Terapia epigenómica en Rotavirus                                                                          

TEMA: 
Caracterización del genoma de cepas de rotavirus

MECANISMO EPIGENÓMICO:
Metilación del ADN

CÓMO LO HIZO:
Mediada por la familia de proteínas de ADN metiltransferasas, que catalizan la edición de un grupo metilo en el quinto átomo de carbono de un residuo de citosina para formar 5-metil citosina, el cual va a impactar sobre el nivel de compactación de la cromatina, afecta la interacción entre el ADN y los factores de transcripción y, consecuentemente, influencia la expresión genética

RESULTADOS:

• Reducción en la replicación del ADN viral en el huésped.
• Inhibir la expresión del interferón tipo I y contrarrestar el NF kB.

Fuente:

1. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5845698/

 Técnica de edición de Ácidos Nucleicos en Gastroenteritis por Rotavirus.      

Tipo de Edición:
In-vivo: Somática

Dirigido hacia:
ARN viral : Segmento 5 del genoma del RV

Dirigido por:
ARNm : CRISPR-Csy4

Órgano a tratar:
Epitelio del estomago.

Vía de administración:
Parenteral

Resultados:
Corto plazo: Nucleasas CRISPR se han aprovechado para editar varios genomas de ADN viral o sus intermediarios de replicación de ADN, incluidos los del virus de retrovirus.

Mediano plazo: Encontrar la eficacia de los DLL en la replicación del virus en diferentes virus.

Largo plazo: Uso para la identificación de fármacos terapéuticos dirigidos al montaje de archivos DLL u otras vías asociadas con la transcripción, para reducir su replicación en el epitelio

Fuente:

1.  https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2211124720311943

Terapia con Stem Cells en Gastroenteritis por Rotavirus.                                     

TEMA.
Esteroides intestinales humanos: nuevo modelo para estudiar infección por rotavirus humano, restricción hospedador y fisiopatología

TIPO DE CÉLULAS MADRE.
Tejidos somáticos mesenquimales del intestino delgado.

MÉTODO DE OBTENCIÓN.
- Muestras de biopsia duodenales e ileales de adultos durante endoscopía.
- Tejido yeyunal se obtuvo por cirugía bacteriana.
- Los enteroides intestinales humanos se obtuvieron partir de muestras de tejido mediante medios completo con factores de crecimiento y medios completos sin factores de crecimiento.

VÍA DE ADMINISTRACIÓN.
- Inyectaron por vía intramuscular.

RESULTADOS.
- Enteroides nuevo modelo un vitro del epitelio del intestino delgado humano, 
- Aumento de células epiteliales diferenciadas, incluyendo enterocitos absorbentes, células enteroendocrinas y células caliciformes.
- Enteroides del intestino delgado humano son más susceptibles a la infección por rotavirus humano homólogo.
- Enteroides apoyan la replicación robusta del rotavirus humano G3P y G1 pero no una atenuada de vacuna contra el rotavirus humano G1.
- Rotavirus humano infecta preferencialmente enterocitos diferenciados y células enteroendocrinas del epitelio del intestino delgado humano.
- Enteroide intestinales humanos se hinchan en respuestas a la infección por HRV y la enterotoxina NSP4.

Fuente:

1. https://jvi.asm.org/content/90/1/43

 Transgénico animal Gastroenteritis por Rotavirus.                                               

TEMA: Vacuna de nanoparticulas de ferritina vp6-rotavirus genera protección contra infección viral.

TIPO ANIMAL TRANSGÉNICO: Ratones transgénicos “KNOCKIN”

MÉTODO: Transferencia de Southern, RT-PCR

USO: Medico, Vacuna recombinante de nanopartículas VP6-ferritina. (1)

VENTAJAS.

• Alimentos con mejores y más cantidad de nutrientes.
• Aceleración en el crecimiento de plantas y animales.
• Capacidad de los alimentos para utilizarse como medicamentos o vacunas para la prevención y el tratamiento de enfermedades.
• Menos uso de pesticidas.
• Plantas resistentes a la sequía y a enfermedades.

DESVENTAJAS.

• Plantas y animales transgénicos pueden desarrollar otras enfermedades.
• Desarrollo de alergias severas.
• Aparición de enfermedades nuevas y no tratables.
• Resistencia a los antibióticos.
• Aumento de las sustancias tóxicas y contaminación del medio ambiente por las grandes cantidades de herbicidas y plaguicidas.

Fuentes

1. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6341625/

2. http://revista-academica.utb.edu.ec/index.php/pertacade/article/view/174/144

ADN recombinante en la naturaleza y artificial en Gastroenteritis por rotavirus.

ADN recombinante en la naturaleza
Se recombina de forma natural mediante procesos como la reproducción sexual, la transformación bacteriana y infección viral. La reproducción del rotavirus, se da al tener contacto con los enterocitos, por la infección viral. Dentro de esta nucleocápside se encuentra los 11 segmentos de ARN de doble cadena (ARNdc) que constituyen el genoma del rotavirus. Estan organizados con simetria que parece depender del esamble icosahédrico de VP2, cual al hacer contacto con los segmentos de ARN, induce en estos a su recombinación. Las proteínas VP1, VP2 y VP3 que están involucradas en la organización del genoma dentro de la nucleocápside mediante interacciones ARN-proteína.

ADN recombinante Artificial.

T: Un antígeno recombinante de rotavirus basado en la proteína de cepa del virus mosaico de alternanthera.

O: Obtener un antígeno recombinante del rotavirus A basado en el epítopo de VP6 con AltMV CP como portador.

G: GenBank: FJ822136.1

ER: PagI y BamHI

EL: ADN ligasa T4

V: Pqe-60

CR: Procariota: Escherichia coli

MTG: Inmunotransferencia

MIC: Cultivo, Electroforesis en gel de agarosa, SDS-PAGE.

Fuente:

1. https://www.nature.com/articles/nrdp201783

2. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7222081/

 Prueba de Southern Blot para Gastroenteritis por Rotavirus Grupo A.

La hidratación Southern blot como sistema de confirmación de la naturaleza del amplímero porque, además, incrementaba la sensibilidad del método de detección molecular. La sonda diseñada "probe VP6" (5´ CAA ATG ATA ACT ATG AAT GG) conjugada con digoxigenina era especifica de una región interna del amplímero y reconocía una región del segmento 6 muy conservada entre los de rotavirus del grupo A conocidos. En primer lugar se transfería el DNA del gel de agarosa a una membrana de nylos, luego se procedía con la hidratación, para finalmente proceder con la revelación.

Fuente:

1. http://bdigital.dgse.uaa.mx:8080/xmlui/handle/11317/1822

 PCR en Gastroenteritis por rotavirus.                                                          

Tema: Conducta terapéutica de los médicos ante el resultado de las pruebas de detección de patógenos en niños con diarrea aguda.

Objetivo: determinar el impacto de herramientas moleculares para detección de patógenos virales y bacterianos en las decisiones terapéuticas antibióticas en diarrea aguda.

Tipos de Muestras: Heces.

Tipo de Ácidos Nucleicos: ADN viral

Extracción de ADN: Disrupción celular (lisis)

Genes a Codificar: VP4        776aa           VP7         326aa

Tipo de PCR: PCR Multiplex.

PASOS                                                              TIEMPO                                                 TEMPERATURA

• Desnaturalización                                 30s                                                                75°C
• Hidratación                                           60s                                                                60°C
• Elongación                                            60s                                                                72°

Visualización: Electroforesis en gel.

Sensibilidad y Especificidad

                                                                   Sensibilidad                                                   Especificidad

Fiebre                                                             67%                                                             46%

Vómitos                                                          78%                                                             41%

Deshidratación                                                 9%                                                              95%

Desnutrición                                                   18%                                                              93%

Fuente:

1. https://www.medigraphic.com/pdfs/pediat/sp-2018/sp181b.pdf

 Alteraciones de la Epigenómica de la Gastroenteritis por rotavirus                  

Como ya conocemos la epigenómica abarca el estudio de los elementos funcionales clave que regulan la expresión génica en una célula. Dentro de estos elementos funcionales encontramos al medio ambiente punto de vital importancia dentro de la gastroenteritis por rotavirus debido a ser transmitido cuando existe una mala higiene el microbioma intestinal tiene una importancia debido a que si existe alguna alteración en ella puede beneficiar a la mutación del virus. Se han encontrado que la falta de eficacia de las vacunas en determinadas poblaciones es debida a que los pacientes son genéticamente resistentes a los virus a partir de los cuales se sintetizaron las vacunas. El trabajo apunta a que los genes FUT2 y FUT3, responsables de producir determinados antígenos en las células del intestino, median la susceptibilidad a la infección por rotavirus sintomática.

Fuente

1. https://www.nature.com/articles/nature18847

2. https://dspace.unl.edu.ec/jspui/bitstream/123456789/22206/3/Valeria%20Michelle%20Ordo%C3%B1ez%20Torres.pdf

 Alteración de la traducción en la Gastroenteritis por Rotavirus                  

Es importante entender que cualquier cambio en el ADN repercutirá en el ARNm llevando a la producción de proteínas que no funcionan. A partir de una duplicación parcial de una secuencia que comienza después del codón stop ORF y se extiende hasta el extre   3´ y da lugar a una región 3´ no traducida que no afecta al producto proteico del segmento. Puede darse delecciones de fragmentos de ARN aunque son raras, la más frecuente se da en el segmento 11 del genoma. Aunque se ha observado este evento en los segmentos 5 a 10. Los virones de triple cada maduros del rotavirus tardan en producirse 10-12 horas y se liberan en grandes cantidades al lumen intestinal, abandonando la células mediante lisis.

Fuente:

1. http://www.microbiologybook.org/Spanish-Virology/spanish-chapter4.htm

2. https://www.news-medical.net/health/Rotavirus-Mechanisms-(Spanish).aspx